HPLC असफलता र समाधानहरूको लागि सबैभन्दा प्रवण

उच्च परिशुद्धता यन्त्रको रूपमा, HPLC ले सजिलैसँग केही साना समस्याहरू निम्त्याउन सक्छ यदि यो प्रयोगको क्रममा सही तरिकाले सञ्चालन गरिएन भने।सबैभन्दा सामान्य समस्याहरू मध्ये एक स्तम्भ कम्प्रेसन समस्या हो।कसरी एक दोषपूर्ण क्रोमेटोग्राफ चाँडै समस्या निवारण गर्न।HPLC प्रणालीमा मुख्यतया एक जलाशय बोतल, एक पम्प, एक इन्जेक्टर, एक स्तम्भ, एक स्तम्भ तापमान कक्ष, एक डिटेक्टर र एक डाटा प्रोसेसिंग प्रणाली हुन्छ।सम्पूर्ण प्रणालीको लागि, स्तम्भहरू, पम्पहरू र डिटेक्टरहरू मुख्य कम्पोनेन्टहरू र मुख्य स्थानहरू हुन् जुन समस्याहरूको खतरामा छन्।

स्तम्भ दबाबको कुञ्जी क्षेत्र हो जुन HPLC प्रयोग गर्दा नजिकको ध्यान चाहिन्छ।स्तम्भ दबाबको स्थिरता क्रोमेटोग्राफिक शिखर आकार, स्तम्भ दक्षता, विभाजन दक्षता र अवधारण समयसँग नजिकको सम्बन्ध छ।स्तम्भ दबाब स्थिरताको मतलब दबाव मान स्थिर मानमा स्थिर छ भन्ने होइन, तर दबाबको उतार चढाव दायरा 345kPa वा 50PSI बीचको हुन्छ (स्तम्भको दबाब स्थिर हुँदा र बिस्तारै परिवर्तन हुँदा ग्रेडियन्ट इल्युसनको प्रयोगको लागि अनुमति दिन्छ)।धेरै उच्च वा धेरै कम दबाब एक स्तम्भ दबाव समस्या हो।

HPLC असफलता र समाधानहरूको लागि सबैभन्दा प्रवण

1, उच्च दबाव HPLC को प्रयोग मा सबै भन्दा साधारण समस्या हो।यसको मतलब अचानक दबाब बढ्छ।सामान्यतया, त्यहाँ निम्न कारणहरू छन्: (1) सामान्यतया, यो प्रवाह च्यानल अवरोध को कारण हो।यस बिन्दुमा, हामीले यसलाई टुक्रा टुक्रा जाँच गर्नुपर्छ।aपहिले, भ्याकुम पम्पको इनलेट काट्नुहोस्।यस बिन्दुमा, PEEK ट्यूब तरल पदार्थले भरिएको थियो ताकि PEEK ट्यूब विलायक बोतल भन्दा सानो थियो कि तरल इच्छा अनुसार टपकिरहेको थियो।यदि तरल टपकिरहेको छैन वा बिस्तारै टपकिरहेको छैन भने, विलायक फिल्टर हेड अवरुद्ध छ।उपचार: ३०% नाइट्रिक एसिडमा आधा घण्टा भिजाएर अति शुद्ध पानीले कुल्ला गर्नुहोस्।यदि तरल अनियमित रूपमा ड्रिप हुन्छ भने, विलायक फिल्टर हेड सामान्य छ र जाँच गरिँदैछ;bपर्ज भल्भ खोल्नुहोस् ताकि मोबाइल फेज स्तम्भबाट पार नहोस्, र यदि दबाब उल्लेखनीय रूपमा कम भएन भने, फिल्टर सेतो हेड अवरुद्ध हुन्छ।उपचार: फिल्टर गरिएको ह्वाइटहेडहरू हटाइयो र आधा घण्टाको लागि 10% isopropanol को साथ sonicated।दबाव 100PSI भन्दा तल खस्छ भनी मान्दै, फिल्टर गरिएको सेतो हेड सामान्य छ र जाँच भइरहेको छ;गस्तम्भको निकास अन्त्य हटाउनुहोस्, यदि दबाब घट्दैन भने, स्तम्भ अवरुद्ध छ।उपचार: यदि यो बफर नुनको अवरोध हो भने, दबाब सामान्य नभएसम्म 95% कुल्ला गर्नुहोस्।यदि अवरोध केही उच्च रूपमा संरक्षित सामग्रीको कारणले गर्दा, वर्तमान मोबाइल चरण भन्दा बलियो प्रवाह सामान्य दबाब तिर हतार गर्न प्रयोग गर्नुपर्छ।यदि माथिको विधि अनुसार दीर्घकालीन सफाई दबाब घट्दैन भने, स्तम्भको इनलेट र आउटलेटलाई यसको विपरीत उपकरणमा जडान भएको मान्न सकिन्छ, र स्तम्भलाई मोबाइल चरणको साथ सफा गर्न सकिन्छ।यस समयमा, यदि स्तम्भको दबाब अझै पनि कम गरिएको छैन भने, स्तम्भ प्रवेश द्वार सिभ प्लेट मात्र प्रतिस्थापन गर्न सकिन्छ, तर एक पटक सञ्चालन राम्रो छैन, यो स्तम्भ प्रभाव को कमी गर्न नेतृत्व गर्न सजिलो छ, त्यसैले कम प्रयोग गर्ने प्रयास गर्नुहोस्।कठिन समस्याहरूको लागि, स्तम्भ प्रतिस्थापन विचार गर्न सकिन्छ।

(२) गलत प्रवाह दर सेटिङ: सही प्रवाह दर रिसेट गर्न सकिन्छ।

(3) गलत प्रवाह अनुपात: प्रवाह को विभिन्न अनुपात को चिपचिपापन सूचकांक फरक छ, र उच्च चिपचिपापन संग प्रवाह को संगत प्रणाली दबाव पनि ठूलो छ।यदि सम्भव छ भने, कम चिपचिपापन सॉल्भेन्टहरू प्रतिस्थापन गर्न वा पुन: सेट र तयार गर्न सकिन्छ।

(4) प्रणाली दबाव शून्य बहाव: तरल स्तर सेन्सरको शून्य समायोजन गर्नुहोस्।

2, दबाब धेरै कम छ (1) सामान्यतया प्रणाली चुहावट को कारण हो।के गर्ने: प्रत्येक जडान फेला पार्नुहोस्, विशेष गरी स्तम्भको दुवै छेउमा इन्टरफेस, र चुहावट क्षेत्र कडा गर्नुहोस्।पोस्ट हटाउनुहोस् र उपयुक्त बलको साथ PTFE फिल्मलाई कस्नुहोस् वा लाइन गर्नुहोस्।

(2) ग्यास पम्पमा प्रवेश गर्छ, तर दबाव सामान्यतया यस समयमा अस्थिर हुन्छ, उच्च र कम।अझ गम्भीर रूपमा, पम्पले तरल पदार्थ अवशोषित गर्न सक्षम हुनेछैन।उपचार विधि: सफाई भल्भ खोल्नुहोस् र 3 ~ 5ml/मिनेटको प्रवाह दरमा सफा गर्नुहोस्।यदि होइन भने, हावा बुलबुले एक समर्पित सुई ट्यूब प्रयोग गरेर निकास भल्भ मा एस्पिरेट गरिएको थियो।

(३) मोबाइल फेज आउटफ्लो छैन: जलाशयको बोतलमा मोबाइल फेज छ कि छैन, मोबाइल फेजमा सिङ्क डुबेको छ वा छैन, पम्प चलिरहेको छ कि छैन भनी जाँच गर्नुहोस्।

(4) सन्दर्भ भल्भ बन्द छैन: सन्दर्भ भल्भ धीमा पछि बन्द छ।यो सामान्यतया ०.१ मा जान्छ।सन्दर्भ भल्भ बन्द गरेपछि ~ 0.2mL/ मिनेट।

सारांश:

यस पेपरमा, तरल क्रोमेटोग्राफीमा मात्र सामान्य समस्याहरू विश्लेषण गरिएको छ।निस्सन्देह, हाम्रो व्यावहारिक प्रयोगमा, हामीले थप अन्य समस्याहरूको सामना गर्नेछौं।गल्ती ह्यान्डलिङमा, हामीले निम्न सिद्धान्तहरू पालना गर्नुपर्छ: काल्पनिक कारक र समस्या बीचको सम्बन्ध निर्धारण गर्न एक पटकमा एउटा कारक मात्र परिवर्तन गर्नुहोस्;सामान्यतया, समस्या निवारणका लागि भागहरू प्रतिस्थापन गर्दा, हामीले फोहोर रोक्नको लागि भत्काइएका अक्षुण्ण भागहरूलाई फिर्ता ठाउँमा राख्न ध्यान दिनुपर्छ;राम्रो रेकर्ड गर्ने बानी गल्ती ह्यान्डलिङको सफलताको कुञ्जी हो।अन्तमा, HPLC प्रयोग गर्दा, नमूना पूर्व-उपचार र उपकरणको उचित सञ्चालन र मर्मतमा ध्यान दिन महत्त्वपूर्ण छ।