फ्रेट पेप्टाइड टेक्नोलोजी

प्रतिदीप्ति अनुनाद ऊर्जा स्थानान्तरण (FRET)

फ्लोरोसेन्स अनुनाद ऊर्जा स्थानान्तरण (FRET) एक गैर-विकिरणीय ऊर्जा स्थानान्तरण प्रक्रिया हो जसमा दाता उत्तेजित राज्य ऊर्जा अन्तरआणविक विद्युत युगलहरूको अन्तरक्रिया मार्फत स्वीकारकर्ता उत्साहित अवस्थामा हस्तान्तरण गरिन्छ।यो प्रक्रियामा फोटानहरू समावेश हुँदैन र त्यसैले गैर-विकिरणीय हुन्छ।यस परखमा छिटो, संवेदनशील र सरल हुने फाइदाहरू छन्।

FRET परखमा प्रयोग गरिएको डाई समान हुन सक्छ।तर धेरै अनुप्रयोगहरूमा, विभिन्न रंगहरू वास्तवमा प्रयोग गरिन्छ।छोटकरीमा, चमकदार अनुनाद ऊर्जाको स्थानान्तरण भनेको दाता समूह उत्साहित हुँदा दाता (डाइ 1) बाट स्वीकारकर्ता (डाइ 2) ​​मा द्विध्रुवहरूको एक जोडी हस्तान्तरण हो।सामान्यतया, डोनर फ्लोरोफोर समूहको उत्सर्जन स्पेक्ट्रम स्वीकारकर्ता समूहको अवशोषण स्पेक्ट्रमसँग ओभरल्याप हुन्छ।"जब दुई फ्लोरोफोरहरू बीचको दूरी उपयुक्त हुन्छ (10 - 100 A), दाताबाट ग्रहणकर्तामा फ्लोरोफोर ऊर्जाको स्थानान्तरण अवलोकन गर्न सकिन्छ।"ऊर्जा स्थानान्तरण को विधि रिसेप्टर को रासायनिक संरचना मा निर्भर गर्दछ:

1. आणविक कम्पनमा रूपान्तरण हुन्छ, अर्थात्, ऊर्जा स्थानान्तरणको चमकदार प्रकाश गायब हुन्छ।(रिसेप्टर एक प्रकाश शमन छ)

2. उत्सर्जन रिसेप्टर भन्दा बढी तीव्र हुन्छ, जसको परिणामस्वरूप माध्यमिक प्रतिदीप्ति स्पेक्ट्रममा रेडशिफ्ट हुन्छ।"(रिसेप्टरहरू चमकदार उत्सर्जनहरू हुन्)।

दाता समूह (EDANS) र स्वीकारकर्ता जीन (DABCYL) एचआईभी प्रोटीजको प्राकृतिक सब्सट्रेटसँग समान रूपमा जोडिएको हुन्छ, र जब सब्सट्रेट विच्छेदन हुँदैन, DABCYL ले EDANS क्वेनल गर्न सक्छ र त्यसपछि फ्लोरिनमा पत्ता लगाउन नसकिने बन्न सक्छ।HIV-1 प्रोटीज विच्छेदमा, EDANS अब DABCYL द्वारा निभाउने छैन, र EDANS लुसिफेरेसहरू पछि पत्ता लगाउन सकिन्छ।प्रोटीज अवरोधकहरूको उपलब्धता EDANS को फ्लोरोसेन्स तीव्रतामा परिवर्तनहरूद्वारा निगरानी गर्न सकिन्छ।

FRET peptides peptidase nonspecificity को अध्ययन गर्न को लागी सुविधाजनक उपकरण हो।यसको प्रतिक्रिया प्रक्रिया लगातार निगरानी गर्न सकिन्छ, यसले इन्जाइम गतिविधि पत्ता लगाउनको लागि एक सुविधाजनक विधि प्रदान गर्दछ।दाता/स्वीकारकर्ताद्वारा पेप्टाइड बन्डको हाइड्रोलिसिस पछि उत्पादन गरिएको चमकले न्यानोमोलर सांद्रतामा इन्जाइम गतिविधिको मापन प्रदान गर्दछ।जब FRET पेप्टाइड अक्षुण्ण हुन्छ, यसले आन्तरिक फ्ल्यासको अचानक गायब भएको देखाउँछ, तर जब दाता/स्वीकारकर्ताको विपरित कुनै पनि पेप्टाइड बन्धन तोड्छ, यसले फ्ल्याश निकाल्छ, जुन लगातार पत्ता लगाउन सकिन्छ र त्यसपछि इन्जाइम गतिविधिलाई परिमाण गर्न सकिन्छ।